EXO-FBS-50A-1（SBI）無外泌體血清

貨號：EXO-FBS-50A-1

品牌：SBI

規(guī)格：50ml

當外泌體在1980年被發(fā)現(xiàn)后，其被認為是細胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、腫瘤侵襲等方方面面。有研究表明腫瘤來源的外泌體參與到腫瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導致大量新生血管的生成，促進了腫瘤的生長與侵襲。

外泌體——基礎(chǔ)知識篇

細胞外囊泡（Extracellular Vesicles，EVs）是指細胞主動分泌的具有膜結(jié)構(gòu)的微小囊泡的統(tǒng)稱，幾乎所有的細胞都會分泌EVs，然而EVs最初被認為是細胞向外排泄的“垃圾"，是細胞移除碎片和清除特定大分子的一種途徑。根據(jù)大小、生物特性和形成過程的不同，EVs主要分為外泌體（exosomes）、微囊泡（microvesicles）、和凋亡小體（apoptotic bodies）三大類。近十年來，研究學者重新認識了EVs的重要性，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)EVs可以作為遺傳信息的傳遞者，攜帶和傳遞信號分子運輸?shù)较噜忂h處的細胞，從而調(diào)節(jié)細胞的生理和病理的狀態(tài)，參與許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程，其中對于外泌體的研究最為火熱。

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外泌體——研究思路篇

01外泌體的樣本來源

由于研究細胞分泌的外泌體，需要避免培養(yǎng)基中其它外源性外泌體對細胞分泌外泌體的影響，目前采用以下方法獲取研究樣本：血清饑餓培養(yǎng)、去外泌體血清培養(yǎng)、無血清體系培養(yǎng)、其它樣本來源。

01血清饑餓培養(yǎng)

一般是指通過降低培養(yǎng)液中的血清濃度，使所培養(yǎng)的細胞因缺乏血清中的生長因子而不能分裂，這個操作常用來做細胞同步化分裂。常規(guī)操作就是在細胞培養(yǎng)至融合度為50-60%左右，撤去含血清的*培養(yǎng)基，更換為基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行饑餓培養(yǎng)細胞至融合度為80%左右，收獲細胞上清進行下游的研究。但血清饑餓培養(yǎng)收獲的外泌體量有限且質(zhì)量較低。

02去外泌體血清培養(yǎng)

為了減少或避免血清饑餓培養(yǎng)對細胞分泌外泌體的影響，去外泌體血清培養(yǎng)細胞成為大多數(shù)學者選擇的一種方式。去外泌體血清可適用于大部分細胞培養(yǎng)，基本可維持與正常胎牛血清中相同生長速率和形態(tài)。在使用各種方法去除胎牛血清中大部分的外泌體后添加至培養(yǎng)基中配制成去外泌體血清*培養(yǎng)基，應(yīng)用于細胞外泌體的研究。

03無血清體系培養(yǎng)

從饑餓培養(yǎng)到去外泌體血清培養(yǎng)，再到無血清體系培養(yǎng)。這是針對外泌體研究所做出的培養(yǎng)基改善與優(yōu)化。也讓學者們能夠了解到細胞培養(yǎng)所需要的營養(yǎng)成分。目前無血清體系的培養(yǎng)基可分為含血小板裂解物（含外泌體）的無血清培養(yǎng)基、配方明確的無血清培養(yǎng)基等，其中配方明確的無血清體系讓研究細胞外泌體的結(jié)果更加準確。

04其它外泌體樣本的來源

除了細胞來源的外泌體樣本研究最為廣泛，血漿、血清也是多數(shù)學者的研究樣本，其它的樣本包括唾液、腦脊液、乳汁、尿液等生物體液，均可以作為外泌體研究的樣本來源。

HeLa 人宮頸癌細胞

143B 人骨肉瘤細胞

293T 人胚腎細胞

A2780 人卵巢癌細胞

A549 人非小細胞肺癌細胞

A673 人尤因肉瘤細胞

AGS 人胃腺癌細胞

BGC823 人胃腺癌細胞(低分化)

C33A 人宮頸癌細胞

CACO2 人結(jié)直腸腺癌細胞

COLO205 人結(jié)腸癌細胞

DU145 人前列腺癌細胞

ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

H1650 人非小細胞肺癌細胞

H460 人大細胞肺癌細胞

HACAT 人永生化表皮細胞

HCT116 人結(jié)腸癌細胞

HEK-293 人胚腎細胞

HEPG2 人肝癌細胞

HGC-27 人胃癌細胞(未分化)

HT-29 人結(jié)腸癌細胞

t24 人膀胱癌細胞

KYSE150 人食道癌細胞

L02(HL7702)(QSG-7701)(7402)(bel7404) 人正常肝細胞

LOVO 人結(jié)腸癌細胞

MCF-10A 人正常乳腺上皮細胞

MCF7 人乳腺癌細胞

LX-2 人肝星狀細胞

MDA-MB-468 人乳腺癌細胞

MIA Paca2 人胰腺癌細胞

NCI-H1299 人非小細胞肺癌細胞

PANC-1 人胰腺癌細胞

RBE 人肝膽管癌細胞

SAOS-2 人成骨肉瘤細胞

SiHa 人子宮頸鱗癌細胞

NB 4 急性早幼粒細胞白血病細胞

SPC-A-1 人肺腺癌細胞

SW480 人結(jié)腸癌細胞

U-87MG 人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞

ZR-75-1 人乳腺癌細胞

SW1116 人結(jié)腸腺癌細胞

293A 人胚腎細胞

SGC-7901 人胃腺癌細胞

Ishikawa 人子宮內(nèi)膜癌細胞

Eca-109 人食管癌細胞

RD-ES 人尤文氏肉瘤

NCI-H1437 人肺癌細胞

HOS 人骨肉瘤細胞

Hela S3 人宮頸癌細胞

ECC1 人宮頸內(nèi)膜腺癌細胞

SUP-B15 人Ph+急淋白血病細胞系

TF-1 人血液白血病細胞

NCI-H446 人小細胞肺癌細胞

GES-1 人胃正常黏膜上皮細胞

IOSE80 人卵巢正常上皮細胞株

sw-13 人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞

KGN 人卵巢顆粒細胞癌

U937 人組織細胞淋巴瘤細胞

SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化細胞

tpc-1 人乳頭瘤狀甲狀腺癌細胞

hela-luci Luciferase穩(wěn)定表達Hela細胞

colo320 人結(jié)腸癌細胞

bxpc-3 人胰腺腺癌細胞

raji 人Burkitt's淋巴瘤細胞

5637 人膀胱癌細胞

chang-liver 人肝細胞(已被hela污染）

a549-gfp gfp標記的A549細胞

hs578.t 人乳腺癌細胞

T24 人膀胱移行細胞癌細胞

K562 人慢性髓系白血病細胞

EH-GB1 人膽囊癌細胞

skov-3 人卵巢腺癌細胞

ECV304 人膀胱癌細胞（T24衍生物）

nci-n87 人胃癌細胞

B-CPAP 人甲狀腺癌細胞

NCI-H1975 人非小細胞肺腺癌細胞

HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

J82 人膀胱癌細胞

A431 人皮膚鱗癌細胞

MG63 人骨肉瘤細胞

SW48 人結(jié)腸癌細胞

ME180 人宮頸表皮樣癌

hepaRG-GFP Gfp標記的人肝癌細胞

BEAS-2B 人正常肺上皮細胞

THP-1   人髓系白血病單核細胞

PC-9 人肺癌細胞

Fadu 人咽鱗癌細胞

Huh7 人肝癌細胞

HCCC9810 人肝癌細胞

Jurkat cloneE6-1 人急性T淋巴細胞白血病細胞

KBM-7 人慢性粒細胞白血病細胞

GBC-SD 人膽囊癌細胞

JEKO-1 人套細胞淋巴癌細胞

CAL-27 人口腔鱗癌

DB 彌漫大B細胞淋巴瘤細胞

mp38

nci-h226 人肺鱗癌細胞

hepg2.2.15 人肝癌細胞

SK-BR-3 人乳腺腺癌細胞

SNU-1 人胃癌細胞

su-dhl-6 人B細胞淋巴瘤細胞

HL-60 人早幼粒急性白血病細胞株

nk-92mi 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

kg-1 人急性骨髓性白血病細胞

nci-h209 人小細胞肺癌細胞

sk-hep-1 人肝癌細胞

sw579 人甲狀腺鱗癌細胞

nthy-ori-3-1 人甲狀腺正常細胞

bt474 人乳腺導管癌細胞

ncm460 人正常結(jié)腸上皮細胞

hmec-1 人微血管內(nèi)皮細胞

mrc5 人胚肺細胞株

t2 (atcc) 人T2細胞

22rv1 人前列腺癌細胞

hct8 人結(jié)直腸腺癌細胞

786-o 人腎透明細胞腺癌細胞

SKOV3-GFP 轉(zhuǎn)染GFP的人卵巢癌細胞

RKO 人結(jié)腸癌細胞

calu-1 人肺癌細胞

kb 人口腔表皮樣癌細胞

ovcar3 人卵巢腺癌細胞

u937-dc-sign 人組織細胞淋巴瘤細胞

a375 人惡性黑色素瘤瘤株

u2OS 人成骨肉瘤細胞

h69ar 人小細胞肺癌細胞

sk-mel-28 人皮膚惡性黑色素瘤

95D 人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞

nci-h226 人肺鱗癌細胞

calu3 人肺腺癌細胞

C666-1 人鼻咽癌細胞

HT1080 人纖維肉瘤細胞

ASPC-1 人胰腺癌細胞

TT 人髓樣甲狀腺腫瘤細胞

NOZ 人膽囊癌細胞

HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞

mda-mb-453 人乳腺癌細胞

TFK-1 人膽管癌細胞

FHs 74 Int 人小腸上皮細胞

H9胚胎干細胞 人胚胎干細胞

caki-2 人腎透明細胞癌細胞

mda-mb-231 人乳腺癌細胞

pc3 人前列腺細胞

EXO-FBS-50A-1（SBI）無外泌體血清

如何鑒定提取出來的外泌體？

以目前外泌體的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品，也沒有任何一個單一實驗可以確定外泌體的存在。根據(jù)國際細胞外囊泡協(xié)會發(fā)表的指導手冊《MISEV 2018》，外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測標志蛋白三項來驗證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征，WB檢測外泌體標志蛋白。

外泌體如何保存？

不同時間、溫度的保存對不同的外泌體樣本影響不一；如果研究方向為外泌體形態(tài)特征、蛋白或其他功能性分析，在分離后新鮮使用為最佳。目前主流的建議是提取出外泌體后最好是新鮮使用，或低溫短期保存。

短時間幾天內(nèi)可以放4°C，長時間儲存置于-80°C保存。

NTA檢測可以進行外泌體定量嗎？

NTA是物理方法，基于顆粒的布朗運動，因為不管是脂質(zhì)體、蛋白，甚至是PBS中的顆粒（部分實驗室自行配置的PBS中發(fā)現(xiàn)大量顆粒，推薦在外泌體研究中，用VC品牌的PBS（P/N:C3580-0500），避免干擾），都會被軟件讀取，并不能分辨是否為外泌體。但NTA提供的粒徑分布可供判斷所提取的內(nèi)含物是否在外泌體的粒徑范圍內(nèi)；另外，在做外泌體分泌的對比實驗中，NTA提供的濃度值也可以作為重要的參考數(shù)據(jù)。

外泌體NTA檢測需要多少量？

Zetaview儀器的最佳檢測區(qū)間是10^7 particles/ml，且有濃度檢測下限，為10^5 particles/ml，一般進樣量不少于2 ml；

無法準確建議送樣量，檢測需要量與樣本本身濃度有關(guān)，樣本濃，則用量小，反之則多，根據(jù)檢測經(jīng)驗，樣本取用量一般在2 µl-100 µl不等，取用量大于50 µl時大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對樣本有過多稀釋。

一般建議：送樣量不低于30 µl。

外泌體用什么分離方法比較好？

無法明確哪種分離方法比較好，各有千秋，以下列出常用的外泌體分離方法：

超速離心法（差速離心和密度梯度離心）：操作繁瑣，耗時長，分離外泌體純度較高，但得率低，目前分離外泌體主流方法；

尺寸排阻色譜（Size-exclusion chromatography，SEC）：應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子，精確分離大小分子，操作簡便，耗時短，分離外泌體純度較高；

聚合物沉淀法：操作簡便，耗時短，可能會同時分離非囊泡污染物（包括脂蛋白），分離外泌體純度較低；

磁珠免疫法：通過特定的抗體組合從樣本中捕獲不同類型的外泌體，免疫親和技術(shù)具有高特異性、可獲得高純度的外泌體、且不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，是富集表征*的外泌體的優(yōu)選方法。但是此方法效率低，外泌體內(nèi)含物的生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗的進行。

組合方法：如聚合物沉淀法+SEC (CellGS Exo-spin 外泌體純化試劑盒）純化流程溫和，無需高速離心，操作簡便并且產(chǎn)物純度高，分離出的外泌體完好無缺，適用于下游功能研究、WB驗證、RNA分析等。