日本同仁化學(xué)CCK-8試劑盒 Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒）是由同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開(kāi)發(fā)的檢測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性的試劑盒，為MTT法的替代方法，試劑盒中采用自己開(kāi)發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8，在美國(guó)，歐洲等國(guó)家地區(qū)均持有證書(shū)，同仁化學(xué)研究所于2006年在中國(guó)獲得了WST的注冊(cè)商標(biāo)。

CCK-8法與普通的MTT法相比，具有顯著特點(diǎn)：

★靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好

★操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力

★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞

★無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低

★為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開(kāi)即用

★適合于高通量藥物篩選

CCK-8用途：藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)

CCK-8試劑盒在國(guó)內(nèi)科研院所、重點(diǎn)大學(xué)、*醫(yī)院被廣泛應(yīng)用，認(rèn)可度高，使用CCK-8發(fā)表的中外文獻(xiàn)達(dá)600多篇，其中截止08年底SCI影響因子IF＞10分的論文有37篇，高IF38.5分

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics33, 172 - 176 (01 Feb 2003)]

CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較

CCK-8試劑毒性：CCK-8和其他檢測(cè)方法對(duì)比可以得出——CCK-8對(duì)細(xì)胞幾乎無(wú)毒性，不傷害細(xì)胞，細(xì)胞可重復(fù)利用

CCK-8 P公司產(chǎn)品 R公司產(chǎn)品

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CCK-8 試劑盒利用了同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開(kāi)發(fā)的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中；不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。CCK-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當(dāng)穩(wěn)定，并且對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，因此可以長(zhǎng)時(shí)間孵育。日本同仁化學(xué)CCK-8試劑盒

CCK-8 檢測(cè)步驟

1. 向各孔中加入100 μl細(xì)胞懸液。a)

2. 在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)

3. 向各孔中加入各濃度的待測(cè)溶液c)10 μl。

4. 37℃下孵育。

5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

6. 37℃下孵育1-4小時(shí)。e)

7. 測(cè)定450 nm處的OD值。

a) 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。

b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱過(guò)夜預(yù)培養(yǎng)。

c) 使用培養(yǎng)基或PBS來(lái)制備溶液。

d) 如果待測(cè)溶液有還原性，測(cè)定不含細(xì)胞，但含有CCK-8的待測(cè)溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進(jìn)行檢測(cè)。

e) 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

活力計(jì)算

細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度

*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

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