產(chǎn)品名稱：人大細胞肺癌細胞H460   

細胞規(guī)格：1-3×10^6細胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：RPMI-1640+10% FBS

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復(fù)蘇細胞需要1-2周，凍存細胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染、符合標準

研究范圍：僅供科研使用

人大細胞肺癌細胞H460，我司主要經(jīng)營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細胞和細胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

在細胞體外培養(yǎng)的過程中，離開機體保護的細胞是很脆弱的，在陌生的生長環(huán)境下即便是培養(yǎng)條件的輕微改變，也可能對細胞產(chǎn)生無法預(yù)估的影響。在原代細胞培養(yǎng)過程中，即使保持培養(yǎng)條件*一致，在傳代過程中，細胞的存活質(zhì)量也是逐漸下降的。

以人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC細胞）為例，HUVEC細胞是研究內(nèi)皮細胞功能的經(jīng)典體外細胞模型。在心血管疾病的研究中，主要用于研究內(nèi)皮細胞功能改變或損傷后其衍生細胞因子對血壓的影響；在腫瘤研究中，主要用于實體瘤中血管生成的研究。然而，HUVEC在傳代培養(yǎng)過程中，其活力是逐漸衰退的，因此細胞傳代多不超過10代。

傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)主要是通過顯微鏡下形態(tài)學(xué)變化以及傳代培養(yǎng)周期的變化預(yù)估細胞生長生存狀態(tài)。這種主觀判斷既無法量化，也無法進行統(tǒng)計學(xué)分析。因此，目前對細胞存活質(zhì)量的判斷并沒有準確、客觀的統(tǒng)一標準，并且對體外培養(yǎng)細胞的存活質(zhì)量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導(dǎo)致實驗結(jié)果的不穩(wěn)定。

體外細胞的有效培養(yǎng)新概念——“細胞質(zhì)控”。通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷五方面對細胞生長生存狀態(tài)進行全fang位的監(jiān)控。

在這五個方面中，影響大的便是細胞活力，蘇州千舍生物教你如何判斷細胞活力。在體外細胞培養(yǎng)的過程中，細胞總有一些因各種原因而死亡，總細胞中活細胞所占的百分比，即是我們常說的細胞活力。“細胞質(zhì)控”中基礎(chǔ)的指標便是細胞活力。常見的流式細胞設(shè)備及部分細胞計數(shù)儀器都可以對細胞進行計數(shù)，還可以提供準確、客觀的細胞活力數(shù)據(jù)，為“細胞質(zhì)控”提供準確、客觀的統(tǒng)計學(xué)依據(jù)，細胞活力評估并不困難！

只要滿足以下兩個條件就可以進行細胞活力檢測，正常細胞的細胞膜是完整的。

Propidium iodide（PI碘化丙啶）是一種核酸染料，常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測和流式細胞儀分析。PI不能通過正常完整的細胞膜，故細胞在處于壞死或晚期凋亡時細胞膜被破壞，這時可為PI著紅色，可以用來分辨壞死細胞/正常細胞。

加入另一種可以透過細胞膜的核酸染料，就可以通過兩種染料將活細胞和死細胞區(qū)分開。

PI經(jīng)常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535 nm和615 nm。

細胞活力的技術(shù)標準界定

應(yīng)用案例：納米藥物毒性測試

納米藥物的研究是近年來新藥研發(fā)的熱點。納米藥物載體篩選的首要標準是檢測其對細胞的毒性。而在細胞毒性測試中，首先要排除的是基底培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的死細胞，即“噪音信號”。在對新型納米藥物載體SEONLA的研究中，Zaloga等人認為只有活細胞比例超過90%方可進行細胞毒性研究，細胞質(zhì)控的重要性由此可見一斑。

細胞毒性的入門級指標是細胞活力。判斷一種物質(zhì)（化合物、小分子藥物或蛋白質(zhì)等）對細胞的毒性首先要觀察的是其是否或誘導(dǎo)細胞死亡，即細胞活力的變化。以維生素C為例，研究發(fā)現(xiàn)，高濃度維生素C對眼癌細胞Y79 Retinoblastoma Cells具有殺傷作用。文章中，作者以眼癌常用化療藥Melphalan作為對照，對經(jīng)過處理的細胞活性進行檢測，發(fā)現(xiàn)，隨著濃度的升高，維生素C對Y79 Retinoblastoma Cells殺傷作用逐漸增強，并且維生素C對眼癌細胞的殺傷作用優(yōu)于Melphalan。這一實驗結(jié)果為眼癌更安全、更有效的治療方案的提出提供了理論依據(jù)。

除了細胞毒性研究，細胞質(zhì)控在病毒感染或者RNA轉(zhuǎn)染的研究中也是非常重要的。在這一類研究中，轉(zhuǎn)染/感染試劑或多或少都會對細胞已有一定殺傷作用。因此，在轉(zhuǎn)染之前，活細胞需要達到一定的比例才可以保證在轉(zhuǎn)染之后有足夠數(shù)量的細胞進行后續(xù)的研究。而這一比例需要實驗條件摸索才能確定。

怎樣算是消化好了呢？不需要把細胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經(jīng)可以了。

一般能移動了，說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，你可以嘗試，準備100%的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。

一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此，容易聚集，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個細胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間，等待單細胞懸液出現(xiàn)。

比較難消化的細胞：潤洗方法5min還不能消化，以結(jié)腸癌細胞為例，比如HCT15、LS411和KM12細胞，胰酶消化，一般10 cm 培養(yǎng)皿，一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應(yīng)該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

常規(guī)的細胞實驗，受消化影響不是很大：如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細胞例外）。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求*。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響細胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性，來使得細胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。

EDTA的作用：許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，胰酶切割細胞外基質(zhì)的一些負責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于整聯(lián)蛋白的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話），而應(yīng)該想其它辦法。

PBS洗滌：消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細胞，可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化，不需要配制不含Ca，Mg離子的溶液。

每段時間定期對細胞房、培養(yǎng)箱&水盤、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細菌、真菌等微生物的清除，每次操作完都整理好細胞房，帶好手套、口罩、鞋套，防止人為因素污染。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞

NIH/3T3小鼠胚胎細胞

Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細胞

B16 小鼠黑色素瘤細胞

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細胞

SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細胞

F9 小鼠畸胎瘤細胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮細胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細胞

BV2 小鼠小膠質(zhì)細胞  

DC2.4小鼠樹突狀細胞

U14 小鼠子宮頸癌細胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細胞

mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞

HL-1小鼠心肌細胞

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細胞前體細胞

hepa1-6 小鼠肝癌細胞

SP2/0小鼠骨髓瘤細胞

HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系

MC38小鼠結(jié)腸癌細胞

mpc5小鼠足細胞

4T1 小鼠乳腺癌細胞

ANA-1小鼠巨噬細胞

TM4 小鼠睪丸支持細胞

STO 小鼠胚胎成纖維細胞

bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞

J774A.1小鼠單核巨噬細胞

H9C2 大鼠心肌細胞

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌細胞

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細胞

RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細胞

INS-1 大鼠胰島細胞瘤細胞

NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細胞

BHK-21 倉鼠腎成纖維細胞

PK-15 豬腎細胞

Duckembyro 鴨胚胎成纖維細胞

vero 綠猴腎細胞

Hep3B人肝癌細胞

HPAC人胰腺癌細胞

HT-1376 人膀胱癌細胞

JAR 人胎盤絨毛癌細胞

KNS-89 人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養(yǎng)基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養(yǎng)基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02