產(chǎn)品名稱：特惠產(chǎn)品小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞bend.3  

貨號：QS-M029

細胞規(guī)格：1-3×10^6細胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：DMEM+10% FBS

凍存條件：80%*培養(yǎng)液+10%FBS+10%DMSO

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復蘇細胞需要1-2周，凍存細胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染、符合標準

研究范圍：僅供科研使用

特惠產(chǎn)品小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞bend.3  

我司主要經(jīng)營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細胞和細胞培養(yǎng)相關的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

我司以客戶為核心，以產(chǎn)品質(zhì)量求生存，以售后服務求信譽。我們通過不斷改進來提高效率，絕不以犧牲品質(zhì)作為代價。“誠信、創(chuàng)新、嚴謹、專業(yè)”愿以飽滿的熱情期待各界朋友攜手合作，共創(chuàng)輝煌！

生物反應器在生物制藥領域的研發(fā)和生產(chǎn)中大量應用。但是哺乳動物細胞對于周邊的環(huán)境非常敏感，較容易受到通氣，轉速，營養(yǎng)成分及 pH 等多種因素的影響。在本文中，我們簡單介紹了影響細胞培養(yǎng)的因素之一—混合時間及其檢測衡量方法。

1.細胞培養(yǎng)平行性放大的簡單原理

為了快速、穩(wěn)定的實現(xiàn)單抗、疫苗的工業(yè)化生產(chǎn)，其中一部分工作在于對哺乳動物細胞培養(yǎng)進行放大研究。這種研究可以幫助我們從搖瓶至 2000 L 乃至更大規(guī)模的生物反應器培養(yǎng)過程中節(jié)省成本損耗及人力投入。相比于傳統(tǒng)發(fā)酵業(yè)使用的細菌而言，哺乳動物細胞更為脆弱，更易受到流體運動及通氣的損傷。

因此，在大規(guī)模哺乳動物細胞培養(yǎng)過程中，除了*的使用較溫和、剪切力較低的攪拌槳代替?zhèn)鹘y(tǒng)的 Rushton 攪拌槳以外，很多用于衡量流體運動及通氣的模型也幫助大家較快速的實現(xiàn)從小規(guī)模至大規(guī)模哺乳動物細胞培養(yǎng)的轉化。

2. 混合時間

混合時間和攪拌槳的功耗被認為是衡量攪拌槳及轉速的兩個維度。對于生物反應器而言，流體的混合是一個非常重要的參數(shù)，它衡量了反應器是否能很好的給活細胞供給營養(yǎng)成分和氧氣，同時對于剪切力敏感的哺乳動物細胞，如果攪拌轉速過快又會造成很高的剪切力損傷導致細胞死亡或凋亡。所以如何在一定時間內(nèi)有效溫和的對流體進行混合，從而提供給細胞一個舒適的環(huán)境，是衡量混合時間的意義。

簡而言之，在放大過程中，如何保證混合時間在一定的范圍內(nèi)，是平行性放大需要考慮的內(nèi)容之一。

混合時間（θm）指的是流體達到均一性所用的時間，是一個非常復雜的參數(shù)，不僅與攪拌槳葉的設計，槳葉及軸的傾斜角度，槳葉片數(shù)，罐體的三維參數(shù)都息息相關，同時也與實驗參數(shù)息息相關，如培養(yǎng)溫度、通氣情況、功耗等，因此（CFD）建模也經(jīng)常需要矯正存在誤差。所以目前更多的是采用混合時間的實際檢測方法驗證 CFD 模型的優(yōu)劣，從而通過模型模擬大生物反應器上細胞的運行情況。

3.混合時間的檢測方法

3.1直接測量法

對反應器特定條件的混合時間的測定可以通過測量液體體系中 pH，電導，顏色，熒光，溫度的均一性來衡量。

假設用電導或 pH 來測量混合時間，整個測試條件一般用純水或緩沖液代替培養(yǎng)基來降低混合時間測量的成本，這種代替并不會影響混合時間的檢測。

混合時間的測量需要固定溫度，通氣和攪拌速率，并在反應器的中部及下部插入相關電極，通過極短的時間向純水或緩沖液中加入強酸強堿或是強電導溶液（5M NaCl），觀察反應器中部及下部電極的波動情況，若波動小于 95% 即意味著達到平衡。

由于電極的擺放位置直接影響了檢測結果，所以可以在上中下多個部位插入多根電極，以求得到較準確的混合時間數(shù)據(jù)。

這種檢測方法比較簡單，但也會引入誤差，一是來源于電極的數(shù)據(jù)采集和接受的時間差，二是對于 pH 電極而言，離子擴散需要時間因此也會引入一定的時間誤差。因此，相比于 pH 電極的混合時間檢測方法，電導的檢測方法會更為準確，pH 電極會產(chǎn)生 5 - 50% 的高估混合時間的現(xiàn)象。同時由于混合時間一般都是在非通氣狀態(tài)下測試的，通氣也會加快或降低混合時間，會引起 ≤ 15% 的系統(tǒng)誤差。

3.2有色試劑法

同樣，我們可以通過有色試劑的混勻情況來衡量混合時間，如酚酞試劑在堿性環(huán)境中呈現(xiàn)紅色，當過酸時即會顯現(xiàn)無色。顯色測量混合時間法需要用到呈像記錄儀來幫助我們更準確的記錄數(shù)據(jù)，呈像記錄儀記錄來自反應器上方液體的顏色變化情況和時間。

4. 計算及模型

從小罐至大罐放大的過程中，假設僅通過計算來衡量罐體運行參數(shù)和計算混合時間會與真實情況存在較大誤差，目前更多的會使用 CFD 模型模擬大罐運行以期在真實生產(chǎn)中摸索出合適穩(wěn)定易行的運行條件，混合時間就是衡量 CFD 模型建立是否能夠實現(xiàn)小罐模擬大罐的標準之一。

當 Re > 10,000，流體的流動狀態(tài)是紊流，現(xiàn)在已經(jīng)有很多已經(jīng)建立好的 CFD 模型可以直接使用；但由于大型生物反應器中細胞對于剪切力的敏感性，轉速較低，因此大部分情況下，Re < 10,000，此時需要對目前已有的模型進行修正后才可以使用。

在建模中，我們需要考慮的因素包括：攪拌槳直徑，罐體直徑，攪拌槳底部至罐體底部的距離，罐體高度，攪拌槳葉長度，攪拌槳葉個數(shù)，以及攪拌軸及攪拌槳葉各自的傾斜角度，如果有 2 個攪拌槳，2 個攪拌槳之間的距離也是建模的參數(shù)之一。

如果需要考慮通氣對于混合時間的影響，那么通氣孔徑及通氣量也需要放入建模體系中。目前市面上有不少相關建模軟件，此處暫不做推薦。

建模完成后，我們可以通過實際的混合時間與建模得到的混合時間進行對比，誤差小于 5% (置信區(qū)間內(nèi)) 即認為模型可以衡量大罐的運行參數(shù)。

Hyclone胎牛血清FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML

Hyclone優(yōu)等胎牛血清FBS SH30406.05 New Zealand 500ML

Hyclone特級胎牛血清FBS SH30396.03 Canada 500ML

Hyclone特級胎牛血清FBS SH30070.03 USA 500ML

Hyclone活性炭/葡聚糖處理 SH30068.03 USA 500ML

Hyclone馬血清      SH30074.03 USA 500ML

Hyclone烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 Uruguay 500ML

Hyclone標準胎牛血清  SH30071.03 USA 500ML

Hyclone優(yōu)等胎牛血清  SV30160.03 SOUTH AMERICA 500ML

Hyclone新生牛血清 SH30413.02 New Zealand 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-SA-015 SOUTH AMERICA 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-EU-015 SOUTH AMERICA 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-US-015 USA 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-AU-015 AUSTRALIA 500ML

SERANA超低IgG胎牛血清 S-FBS-SA-055 SOUTH AMERICA 500ML

SERANA透析胎牛血清Dialyzed FBS S-FBS-US-065 USA 500ML

SERANA活性炭/葡聚糖處理 S-FBS-AU-045 AUSTRALIA 500ML

BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS SOUTH AMERICA 500ML

BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS New Zealand 500ML

BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS AUSTRALIA 500ML

BOVOGEN新生牛血清   New Zealand 500ML

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 EU 500ML

PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151 EU 500ML

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS SOUTH AMERICA 500ML

BI ES級別胎牛血清 04-002-1A SOUTH AMERICA 500ML

BI 間充質(zhì)干細胞胎牛血清 04-400-1A SOUTH AMERICA 500ML

Corning康寧優(yōu)等胎牛血清 35-076-CV AUSTRALIA 500ML

PAN胎牛血清FBS P30-3302 SOUTH AMERICA 500ML

PAN胎牛血清FBS ST30-3302 SOUTH AMERICA 500ML

PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 SOUTH AMERICA 500ML

PAN胎牛血清FBS Plus ST30-3302P SOUTH AMERICA 500ML

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE 阿根廷 500ML

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 SOUTH AMERICA 500ML

Gemini特級胎牛血清 100-500 USA 500ML

Gemini科研用人AB血清 100-512 USA 100ML

TCB胎牛血清 101ZC New Zealand 500ML

Sigma 特級胎牛血清 F2442 USA 500ML

Sigma正常人AB血清 H4522 USA 100ML

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1 USA 50ML

GIBCO 雙抗 15140-122 100ml

GIBCO 胰酶 25200-056 100ml

GIBCO 胰酶 25200-072 500ml

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT 500ml

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT 500ml

PBS C10010500BT 500ml

1640培養(yǎng)基 C11875500BT 500ml

DMEM/F12 C11330500BT 500ml

MEM C11095500BT 500ml

α-MEM C12571500BT 500ml

HyClone 雙抗 SV30010 100ml

HyClone 胰酶 SH30042.01 100ml

DMEM低糖 SH30021.01 500ml

DMEM高糖（不含丙酮酸鈉） SH30022.01 500ml

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01 500ml

MEM/EBSS SH30024.01 500ml

IMDM SH30228.01 500ml

DMEM高糖（含丙酮酸鈉） SH30243.01 500ml

M199/EBSS SH30253.01 500ml

PBS緩沖液 SH30256.01 500ml

α-MEM SH30265.01 500ml

改良型RPMI-1640 SH30809.01 500ml

DPBS SH30028.02 500ml