血清中的沉淀是怎么回事？

血清中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括各種蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，其中一些物質(zhì)在特定的條件下容易形成沉淀。無(wú)論血清產(chǎn)地、品質(zhì)如何，血清凍融后產(chǎn)生沉淀是無(wú)法避免的，因此各類(lèi)血清以及含有血清的產(chǎn)品都可能會(huì)產(chǎn)生沉淀。

一、血清沉淀是什么？

在血清解凍后發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質(zhì)時(shí)，不必驚慌，這是正?，F(xiàn)象。常見(jiàn)血清的沉淀物有以下幾種：

纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類(lèi)型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中，血清采集、過(guò)濾(3次0.1μm過(guò)濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。

磷酸鈣（Calcium Phosphate）

常見(jiàn)的一種沉淀物，會(huì)造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，并且由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去像在活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

其他成分（Other）

血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀，例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。 

二、血清沉淀是污染嗎？

前面提到過(guò)磷酸鈣在倒置顯微鏡下像小幅振動(dòng)的小黑點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為是微生物污染，但其實(shí)血清沉淀并不是污染。

由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會(huì)加劇磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，故空培血清驗(yàn)證污染的方法也不太合理。

我們可以通過(guò)將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否存在細(xì)菌增殖，并且進(jìn)行革蘭氏染色，觀察判斷是否為微生物污染。

三、血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)嗎？

血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，根據(jù)逍鵬多年細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試經(jīng)驗(yàn)，血清沉淀的多少與血清的使用效果沒(méi)有必然關(guān)系。
建議更換新批次血清的時(shí)候，取少量細(xì)胞進(jìn)行試培養(yǎng)，以確定是否影響后續(xù)細(xì)胞生長(zhǎng)。

四、為了減少血清絮狀物沉淀的出現(xiàn)，在使用過(guò)程中一定要注意以下細(xì)節(jié)：

1. 解凍血清時(shí)，建議不時(shí)將血清搖晃均勻，目的是使溫度及成分均一，減少絮狀物沉淀的發(fā)生；

2. 勿直接將血清由-20℃置37℃解凍，因?yàn)檫@樣溫度變化太大，很容易造成蛋白析出；建議將血清從冷凍室先移至2-8℃冰箱解凍，再放置于室溫進(jìn)行全部解凍；

3. 嚴(yán)禁將血清在37℃長(zhǎng)時(shí)間孵育解凍，否則血清可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，同時(shí)，血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到破壞，從而影響到血清的品質(zhì)；

4. 血清熱滅活容易造成沉淀物增多，若非必要，可以無(wú)需進(jìn)行此步驟；

5. 若必須要做血清的熱滅活，也請(qǐng)遵循56℃，30min的原則，并且不時(shí)搖晃均勻，因?yàn)闇囟冗^(guò)高，時(shí)間過(guò)久或者搖晃不均勻都會(huì)造成沉淀物的增多。

五、如何去除血清中沉淀

非生物污染因素產(chǎn)生的血清沉淀，不會(huì)影響血清本身的功能，但從使用體驗(yàn)角度出發(fā)，大量的沉淀很容易遮擋視線(xiàn)，影響對(duì)培養(yǎng)基狀態(tài)的觀察；而微量沉淀又容易與細(xì)胞污染混淆，影響實(shí)驗(yàn)人員的判斷。

因此，如果血清中有非生物污染的沉淀，想要去除，該如何操作呢？

我們推薦采用低速離心的方法：1000rpm以?xún)?nèi)，1-2分鐘，或簡(jiǎn)單讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里。

一般不推薦過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾。

六、總結(jié)

血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見(jiàn)現(xiàn)象，無(wú)需過(guò)多擔(dān)心，并且不會(huì)影響血清的品質(zhì)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)而言，也是沒(méi)有任何問(wèn)題的，您可以放心使用。