細(xì)胞名稱：MCF-7/ADR人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：乳腺，乳房

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞代數(shù)：10代以內(nèi) 

背景介紹：培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基是不含藥物的，待細(xì)胞狀態(tài)良好，穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)，（一般傳2代保種），可以用含加含400ng/ml的阿霉素藥物培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)，期間會(huì)有少部分細(xì)胞懸浮起來(lái)，屬于正常情況，通過(guò)換液去掉即可。待細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)傳2代后，使用的阿霉素藥物濃度可提高到500ng/ml，凍存時(shí)請(qǐng)不要在培養(yǎng)基中加藥物。

是否導(dǎo)耐藥基因：是

細(xì)胞規(guī)格：1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測(cè)：無(wú)

培養(yǎng)基：89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin+500ng/ml ADR

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

一、細(xì)胞培養(yǎng)操作

TS25 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)；細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；shou次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，加2-3mlwan全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

3. 將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存管  收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；第三天換液并檢查細(xì)胞密度；一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶；將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞凍存操作

   無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存；待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例：

收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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