HL-60 人早幼粒白血病細胞如何培養(yǎng)？

HL-60該細胞是一株早幼粒細胞。 外周血白細胞來自一位患有急性粒-單核細胞白血病的36歲白人女性。 HL-60 自發(fā)分化，丁酸鹽、次黃嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1% to 1.5%)、放線菌素D和視黃酸可以促進分化。 細胞表現(xiàn)出吞噬活性，并對趨化刺激有響應。致癌基因myc表達陽性。

致瘤性

Yes, in nude mice (subcutaneous myeloid tumors). Yes, in semi-solid media.

表達標記

complement, expressed;Fc, expressed

基因表達

tumor necrosis factor (TNF), also known as tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha, TNF alpha), after stimulation with phorbol myristic acid, myc+

保藏機構

ATCC; CCL-240

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備RPMI-1640（含NaHCO3 1.5g/L推薦iCell-128-0002 或者GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L,或者ATCC-formulated RPMI-1640 Medium, Catalog No. 30-2001  ATCC 改良）培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2).培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

SK-MEL-1人皮膚黑色素瘤細胞培養(yǎng)方式？

貨號：WS0029H

培養(yǎng)條件：MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點怎么辦？

首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混油。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下現(xiàn)察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:

(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸:

(2)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不直細胞生長;

(3)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除;

(4)血清等級不足以維持細胞良好的生長，更換高等級的胎牛血清。

相關熱門細胞：

WS0204H 人原髓細胞白血病細胞 HL-60

WS0205H 人胎盤絨膜癌細胞 BeWo

WS0206H 人腎細胞腺癌細胞 ACHN

WS0207H 人套細胞淋巴瘤細胞 Jeko-1

WS0208H 人肝星形細胞 LX-2

WS0209H 人鼻咽癌細胞 C666-1

WS0210H 人子宮頸鱗狀細胞癌細胞 SiHa

WS0211H 人慢性髓系白血病細胞 K562

WS0212H 人皮膚成纖維細胞 BJ

WS0213H 人結腸癌細胞 LOVO

WS0214H 人肝癌亞力山大細胞 PLC/PRF/5

WS0215H 人神經(jīng)母細胞瘤細胞 IMR-32

WS0216H 人口腔鱗狀細胞 WSU-HN30

WS0217H 人腦髓母細胞瘤細胞 LN-229

WS0218H 人腦微血管內皮細胞永生化 hCMEC/D3

WS0219H 人鼻咽上皮細胞系永生化 NP69

WS0220H 人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞 MUM2B

WS0221H 人永生化表皮細胞 HaCaT

WS0222H 人非小細胞肺癌細胞 HCC827

WS0223H 人多形性惡性膠質瘤 T98G

WS0224H 正常人結腸組織細胞 CCD-18CO

WS0225H 人舌鱗癌細胞 CAL-27

WS0226H 人尤文氏肉瘤 RD-ES

WS0227H 人Burkkit淋巴瘤細胞 Daudi

WS0228H 　人卵巢癌細胞H HEY-A8

WS0229H 人膀胱癌細胞 RT-112

WS0230H 人胚肺細胞 MRC-5

WS0231H 人結腸癌細胞 HCT-8

WS0232H 人成骨肉瘤細胞 Saos-2

WS0233H 人結直腸癌細胞 LS513

WS0234H 人橫紋肌肉瘤細胞 A-673

WS0235H 人喉癌細胞 LCC

WS0236H 人膽管癌細胞 HuCCT1

WS0237H 人B淋巴母細胞 HMy2.CIR

WS0238H 人神經(jīng)母細胞瘤細胞 SK-N-SH

WS0239H 人B細胞淋巴瘤細胞 SU-DHL-2

WS0240H 人胃癌細胞 Hs-746T

WS0241H 人急性淋巴母細胞性白血病細胞 MOLT-4

WS0242H 人膀胱移行細胞癌 J82

WS0243H 人乳腺癌細 MDA-MB-175

WS0244H 人食管癌細胞 TE-7

WS0245H 人子宮內膜癌細胞 Ishikawa

WS0246H 人結腸癌細胞 Caco2

WS0247H 人子宮內膜癌細胞 RL120-2

WS0248H 人小細胞肺癌細胞 NCI-H196

WS0249H 人卵巢癌腺癌細胞 NIH:OVCAR-3

WS0250H 人急性髓系細胞白血病細胞 KG-1A

WS0251H 人黑色素瘤細胞 A2058

WS0252H 人肝癌細胞 SNU-387

WS0253H 人腦膜瘤細胞　 IOMM-LEE

WS0254H 人卵巢癌細胞 HO-8910

WS0255H 人食管癌細胞 TE-10

WS0256H 人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞 RD

WS0257H 人急性原粒細胞白血病細胞 KASUMI-1

WS0258H 人結腸癌細胞 SW620

WS0259H 人前列腺癌細胞 PC-3

WS0260H 人小細胞肺癌 DMS-153

WS0261H 人胃癌細胞 NCI-N87

WS0262H 人葡萄膜黑色素瘤 92-1

WS0263H 人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞 Reh

WS0264H 人結腸癌細胞 HCT-116

WS0265H 人乳腺癌細胞 MDA-MB-231

WS0266H 人骨肉瘤細胞 SJSA-1

WS0267H 人Burkitt’s淋巴瘤細胞 RAJI

WS0268H 人T淋巴瘤細胞 H9

WS0269H 人膀胱癌細胞 5637

WS0270H 人喉癌細胞 TU212

WS0271H 人食管腺癌 OE-33

WS0272H 人肺癌細胞 A549

WS0273H 人甲狀腺癌細胞 KTC-1

WS0274H 人滑膜肉瘤細胞 SW-982

WS0275H 人視網(wǎng)膜母細胞瘤 Y79

WS0276H 人結直腸腺癌細胞 COLO320DM

WS0277H 人正常胰腺導管細胞 hTERT-HPNE

WS0278H 人多發(fā)性骨髓瘤細胞 RPMI-8226

WS0279H 人膠質母細胞瘤細胞 A172

WS0280H 人肝母細胞瘤細胞 HuH-6

WS0281H 人乳腺癌細胞 MDA-MB-453

WS0282H 人咽鱗癌細胞 FaDu

WS0283H 人食管癌細胞 Kyse510

WS0284H 人肝癌細胞 Hep3B

WS0285H 人卵巢癌細胞 Caov3

WS0286H 人子宮內膜癌細胞 HEC-1-A

WS0287H 人正常結腸上皮細胞 NCM-460

WS0288H 人卵巢顆粒細胞 KGN

WS0289H 人骨肉瘤細胞 143B

WS0290H 人口腔鱗癌細胞 SCC-25

WS0291H 人胰腺癌細胞 PANC-03.27

WS0292H 人非小細胞肺癌細胞 NCI-H647

WS0293H 人晶體上皮細胞 SRA01/04

WS0294H 人腎癌細胞 769-P