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關(guān)于WinSera血清熱滅活問題

更新時間:2022-08-18點擊次數(shù):1274
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1. 為何會有熱滅活血清呢?

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中,培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活血清。


2. 血清熱滅活是否必要?

血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立,至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟;但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因,卻早已經(jīng)不再成立:

  • 去除支原體污染?

    早期血清加工使用的450nm濾膜,早已被100nm濾膜取代;且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控,血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。


  • 去除補體等對熱敏感的物質(zhì)?

    胎牛血清中含有的補體僅為成年牛血清5-50%,而C3(補體中引起免疫反應(yīng)的主成分)在胎牛血清中則幾乎不能檢出,直接使用血清對大多數(shù)的細(xì)胞株沒有負(fù)面影響。


實驗顯示,大多數(shù)的細(xì)胞不需要熱滅活血清,對于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長速率降低,沉淀物還會顯著增多,不利于細(xì)胞觀察。因此,若非必須,不需要對血清進(jìn)行滅活處理。


3. 血清熱滅活對細(xì)胞生長有幫助嗎?

細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細(xì)胞株的生長能力影響,發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中,熱滅活對6 株細(xì)胞有負(fù)面影響(紅)、3株無影響(綠)、2株有微弱正面改善(黃)。

▲ 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長狀況

所以,在正常操作下,熱滅活通常對“細(xì)胞生長"沒有明顯的促進(jìn)作用,反而會破壞血清內(nèi)生長因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),降低細(xì)胞增殖速度。


4. 血清熱滅活的缺點?

若實驗員設(shè)錯水浴溫度或忘記按計時器,都會導(dǎo)致過高的加熱溫度(下圖)或過長的加熱時間(下圖),進(jìn)而大大降低血清的功能,影響細(xì)胞生長的表現(xiàn)。

缺點1:

▲ 過高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長速度(僅一株未受明顯影響)


缺點2:

▲ 過長的加熱時間降低大多細(xì)胞株生長速度

(僅一株未受明顯影響)


滅活加熱過程會增加血清的沉淀狀況,而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,進(jìn)而耗費大量時間及精力驗證是否污染,導(dǎo)致實驗一再拖延。





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