01

問(wèn)：看說(shuō)明書里，如果樣本濃度高，可以不用稀釋，直接加原液。這個(gè)直接加血清原液，你們自己親自做過(guò)嗎？因?yàn)橹拔覀冇脛e家的，他們說(shuō)明書里，加樣是：10微升樣品加40微升樣品稀釋液。咨詢他們?nèi)绻绻麧舛雀?，可以加原液?jiǎn)幔克麄冋f(shuō)可以，可能他們沒(méi)做過(guò)，說(shuō)可以?？晌覀冏隽耍豢梢?。問(wèn)他們，又說(shuō)是可能離子濃度不夠。

答：ELISA試劑盒檢測(cè)范圍是固定的，樣本是否稀釋是根據(jù)樣本實(shí)際濃度來(lái)選擇的，但前提條件樣本要落在檢測(cè)范圍內(nèi)，濃度高于檢測(cè)范圍，稀釋樣本達(dá)到檢測(cè)范圍內(nèi)，濃度低于檢測(cè)范圍，那這個(gè)試劑盒靈敏度是不夠的。離子濃度跟樣本濃度沒(méi)有關(guān)聯(lián)不是影響ELISA試劑盒檢測(cè)的關(guān)鍵。

02

問(wèn)：雙抗夾心法中，最后TMB用硫酸終止，測(cè)量OD450的時(shí)候是用單波長(zhǎng)450nm還是雙波長(zhǎng)測(cè)量？如果是后者，參考波長(zhǎng)是哪個(gè)？630nm可以嗎？

答：如果有條件的話，就用雙波長(zhǎng)450nm，630nm。如果沒(méi)有，單波長(zhǎng)也可以。

03

問(wèn)：牛免疫球蛋白G（IgG）試劑盒（ELISA）樣本PH值對(duì)這個(gè)指標(biāo)影響大嗎？

答：有，要保持中性。不要太偏酸和太偏堿。規(guī)定最佳PH=7.2-7.4，可耐受PH5.0-9.0，此外PH值都不適用。

04

問(wèn)：樣本PH值偏小，用氫氧化鈉調(diào)PH值合適嗎？

答：合適，而且必須調(diào)！我們之前做的靜脈注射免疫球蛋白PH=4，都是要調(diào)PH到中性。然后再測(cè)定。

05

問(wèn)：

小鼠白細(xì)胞介素-12（IL-12 P35）ELISA Kit

小鼠白細(xì)胞介素-12（IL-12 P40）ELISA Kit

小鼠白細(xì)胞介素-12（IL-12 P70）ELISA Kit  

三個(gè)指標(biāo)有什么區(qū)別和聯(lián)系？

答：完整的IL-12由兩條鏈通過(guò)二硫鍵相連，稱為P70，而這兩條鏈分別稱為P35和P40。

IL-12是一由p35和p40（IL-12β）兩條鏈組成的異源二聚體，兩個(gè)亞單位通過(guò)二硫鍵連接在一起，這種結(jié)構(gòu)在已發(fā)現(xiàn)的IL中所罕見(jiàn)。通常情況下，p40的量遠(yuǎn)超出p70，在鼠中已觀察到p40同源二聚體的產(chǎn)生，是由轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分泌的，p40同源二聚體沒(méi)有生物學(xué)活性，但它能和IL-12Rβ結(jié)合，與p70競(jìng)爭(zhēng)性爭(zhēng)奪IL-12受體（IL-12R）而拮抗其生物學(xué)作用。單獨(dú)的p35不具有生物學(xué)活性，但卻是合成p70的限速因子。

天然IL-12（p70 ）具有*的異源二聚體結(jié)構(gòu),是由p40 和 p35兩個(gè)亞基通過(guò)二硫鍵共價(jià)連接而成的糖基化肽鏈〔相對(duì)分子質(zhì)量為(70～75)×103〕.IL-12 p35和p40基因定位于不同的染色體,各自受不同的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子調(diào)節(jié),按需生成有活性的p70或拮抗性p(40)2及單體p40.活性形式的IL-12 p70需要兩條亞基共同表達(dá),并以1∶1形式進(jìn)行自然組合.對(duì)已報(bào)道的IL-12基因載體來(lái)說(shuō),存在p40和p35不匹配的組合形式〔5-7〕.構(gòu)建rhscIL-12融合基因,可使其在一個(gè)啟動(dòng)子的控制之下,翻譯表達(dá)活性蛋白,保證p40和p35以1∶1比例形成單鏈異二聚體。

白介素-12是p70,p40是其中的一個(gè)亞基。

06

問(wèn)：?jiǎn)魏司奘杉?xì)胞的趨化因子有哪些？

答：CCL2、CCL3、CCL5、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17和CCL22