PANC10.05細胞，人胰腺癌細胞

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PANC10.05細胞，人胰腺癌細胞特性

1） 來源：胰腺

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后一次傳代建議1：2傳代 。                       

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備1640 基礎培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清15%，P/S 1 %

牛胰島素0.01mg/ml。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

      1，細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x10⁶/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

PANC10.05細胞，人胰腺癌細胞收到注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

關于細胞的復蘇需要注意幾點：

A. 整個復蘇過程盡量手腳麻利一些，戰(zhàn)線拉得太長可能影響復蘇效果；

B. 由于“化冰”這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里來的凍存管，放到水里可能會造成翻江倒海的既視感，所以，如果有些萌妹紙害怕的話，可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖；

C. 取凍存管時要謹防凍傷，尤其是夏天，盡管熱也好穿長袖白大褂，一些不經(jīng)意的動作可能會把你的小鮮肉“粘”到冰箱門上

D. 離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進行，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來的凍存液，然后直接加*培養(yǎng)基重懸細胞，接著把細胞轉到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng)。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈，但是就本俠的現(xiàn)有經(jīng)驗來看，似乎影響不大。更有甚者，冰化完后干脆不離心，也不洗DMSO，直接用凍存液重懸了細胞就放到培養(yǎng)皿/瓶，加*培養(yǎng)基混勻就放培養(yǎng)箱了，第二天來換個液就當一切都沒發(fā)生過，足夠、大氣、上檔次！童鞋們?nèi)绻麎驊校部梢試L試這種“懶人法”；

E. 復蘇第二天記得去看看細胞呀，如果狀態(tài)還不錯的話就說明復蘇成功啦；

后本俠還是要嘮叨一點細胞培養(yǎng)箱的重要性，如果培養(yǎng)箱不給力，就不要怪細胞不給面子。培養(yǎng)箱的道道很多，有機會本俠會出番外篇專門講培養(yǎng)箱，這兒呢就簡單說一些比較重要的注意點：1、培養(yǎng)箱里的水盤要一直有水，不然細胞會干死；2、培養(yǎng)箱上顯示的二氧化碳濃度要保持在5%，不然會導致PH異常，影響細胞生長；3、定期用酒精等擦洗培養(yǎng)箱內(nèi)部架子、水盤，防止污染發(fā)生。

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